雞蛋營(yíng)養(yǎng)豐富，含有蛋白質(zhì)、脂肪、膽固醇、卵磷脂、維生素、鐵、鈣、鉀等人體需要的礦物質(zhì)。膽固醇又稱膽甾醇。一種環(huán)戊烷多氫菲的衍生物。早在18世紀(jì)人們已從膽石中發(fā)現(xiàn)了膽固醇，1816年化學(xué)家本歇爾將這種具脂類性質(zhì)的物質(zhì)命名為膽固醇。膽 固醇廣泛存在于動(dòng)物體內(nèi)，尤以腦及神經(jīng)組織中zui為豐富，在腎、脾、皮膚、肝和膽汁中含量也高。其溶解性與脂肪類似，不溶于水，易溶于乙mi、氯仿等溶劑。膽 固醇是動(dòng)物組織細(xì)胞所*的重要物質(zhì)，它不僅參與形成細(xì)胞膜，而且是合成膽汁酸，維生素D以及甾體激素的原料。然而有研究人員提出，雞蛋膽固醇含量相對(duì)較高，過多攝入雞蛋會(huì)導(dǎo)致人體血清膽固醇增高，引發(fā)心血管疾病。由此我們對(duì)雞蛋中膽固醇含量進(jìn)行研究，探索快速檢測(cè)雞蛋中膽固醇含量的方法。
實(shí)驗(yàn)部分
1.儀器與試劑
儀器：Waters液相色譜儀waters 2695（配置高壓泵，紫外檢測(cè)器），萬分之一梅特勒電子天平，渦旋混合儀，離心機(jī)，超聲波清洗器
試劑： 膽固醇標(biāo)準(zhǔn)品，甲醇（色譜純），異丙醇（分析純），**（分析純），石油醚（分析純），無水乙醇（分析純），市售普通雞蛋
2. 色譜條件
色譜柱：C18色譜柱 150mm×4.6mm×5μm；流動(dòng)相：甲醇-異丙醇（4:1，v/v）；流速：1.0mL/min；溫度：25℃； 進(jìn)樣量：20μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：205nm。
3 .標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
準(zhǔn)確稱取膽固醇標(biāo)準(zhǔn)品25mg，于25ml容量瓶中，用無水乙醇溶解稀釋至刻度，得膽固醇儲(chǔ)備液（1.0g/L）。
取膽固醇儲(chǔ)備液0.0，0.5， 1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，1.0ml于10ml容量瓶中，無水乙醇稀釋定容，的濃度為0，0.05 ，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0g/L 膽固醇標(biāo)準(zhǔn)溶液。
4 .樣品前處理
取雞蛋稱重，除去蛋清，準(zhǔn)確稱取蛋黃重量。取蛋黃樣品2.0g，用20ml高純水溶解稀釋混勻，得蛋黃稀釋液（0.1g/ml）。取蛋黃稀釋液1.0ml于 具塞離心管中，加無水乙醇1.0ml，渦旋混勻，加乙mi3.0ml，石油醚3.0ml，渦旋混合，將混合液離心（4000r/min），使液體分層，取上 層有機(jī)相；下層再加入2.0ml**和2.0ml石油醚進(jìn)行萃取，合并上層萃取液，氮吹儀吹干（溫度<30℃），0.5ml乙醇溶解，經(jīng) 0.45μm有機(jī)微孔濾膜過濾后，上機(jī)檢測(cè)。
5.結(jié)果與討論
6.標(biāo)準(zhǔn)工作曲線
配制好的系列膽固醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，在設(shè)定好的色譜條件下進(jìn)行色譜分析，進(jìn)樣量為20μL，保留時(shí)間為6.72min，每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)進(jìn)樣三次，以峰高H（mAU）為縱坐標(biāo)，膽固醇標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度C(g/L)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，線性回歸方程為H=76.45C-0.052，相關(guān)系數(shù)r=0.9991。
7.蛋黃中膽固醇含量
將處理好的蛋黃樣品取樣測(cè)試，進(jìn)樣量20μL，在6.72min膽固醇被洗脫出來，蛋黃其他組分能與膽固醇有效分離，不干擾膽固醇的測(cè)定。由膽固醇標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算膽固醇含量。（液相圖譜件見圖1，結(jié)果見表1）
圖1 蛋黃膽固醇液相圖譜
表1 蛋黃膽固醇含量
樣品編號(hào) | 雞蛋重量g | 蛋黃重量g | 膽固醇含量（mg/g蛋黃） | 膽固醇含量（mg/個(gè)蛋黃） |
1 | 60.23 | 15.76 | 12.11 | 190.85 |
2 | 58.46 | 14.98 | 11.34 | 169.87 |
3 | 59.47 | 15.31 | 10.76 | 164.74 |
8.結(jié)論
本文建立了利用反相液相色譜法快速測(cè)定蛋黃中膽固醇的方法，樣品無需皂化處理，直接用乙mi和石油醚進(jìn)行萃取，大大節(jié)約了樣品前處理時(shí)間，操作快速簡(jiǎn)便， 具有良好的準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性，可做為測(cè)定蛋黃中膽固醇含量的有效方法。另膽固醇主要來自人體自身合成，食物中的膽固醇是次要補(bǔ)充。一般常人每日從食物中攝取 膽固醇200mg，即可滿足身體需要。專家建議每天攝入50mg-300mg膽固醇為佳。
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